胃癌是我国常见的恶性肿瘤, 发病率和死亡率较高, 胃癌的发生发展与遗传、肿瘤抑制基因失活、癌基因激活等多种基因因素有关[1], 而最近国外有研究发现SHH可通过激活癌基因引发多种恶性肿瘤[2]。SHH的表达与胃癌的浸润程度、TNM分期以及淋巴结转移情况等的相关性仍在研究阶段, 本文以2011年1月至2011年12月期间本院收治的68例胃癌患者为研究对象, 对SHH的表达与临床病理特征的关系进行了探讨和分析, 现阐述如下。
2011年1月至2011年12月期间本院收治的胃癌患者68例, 均经手术取病理活组织确诊为胃癌, 所有患者在手术前均未接受过放、化疗, 其中男35例, 女33例;年龄在35～74岁之间, 平均年龄为 (54.32±12.56) 岁;肿瘤病灶直径≤5cm者41例, >5cm者27例;肿瘤位置为:胃底15例, 胃体13例, 胃窦40例;分化程度:高分化12例, 中分化18例, 低分化16例, 未分化22例;根据国际抗癌联盟 (UICC) 制定的胃癌TNM分期标准, Ⅰ期10例, Ⅱ期18例, Ⅲ期23例, Ⅳ期17例;胃癌活组织经手术切除后用10%甲醛固定, 再经梯度酒精脱水, 经石蜡包埋后切成5μm的薄片贴在玻片上, 用烤箱烘烤, 温度调节为60℃, 时间为2d, 最后用SP法进行免疫组织化学染色。
检测试剂选用SP-9 0 01二步法免疫组化试剂、浓缩型DAB试剂盒、Citrate柠檬酸盐缓冲液0.01mL、磷酸盐缓冲液0.01mL;实验抗体选用兔抗人SHH单克隆抗体, 工作浓度为1∶50;仪器选用日本OLYMPUS公司提供的研究级显微镜;生物组织全自动脱水机由上海西域机电系统有限公司提供;石蜡包埋机和切片机均由德国LEICA公司提供。
免疫组织检测系统为S P法, 选用热修复抗原修复方法, 抗原修复液为1mmol/LEDTA, 所有染色操作均严格按照使用说明书进行, 最后进行DAB显色。
阳性对照选用已知SHH阳性的结肠癌组织, 阴性对照用PBS代替一抗。
SHH主要在细胞浆内表达, 注意观察细胞的胞浆, 如出现棕褐色颗粒则为SHH阳性细胞;在400倍显微镜镜下随机观察5个区域及至少500个上皮细胞, 根据阳性细胞的比例对每张切片进行分级:0分为阴性, 评分≥1分即为阳性;阳性率≤30%记为1分, 阳性率30%～70%记为2分;阳性率≥70%即为3分。
应用SPSS 11.5软件对数据进行分析, 组间比较采用χ2检验, 相关性采用Spearman秩相关分析, P<0.05为差异具有统计学意义。
68例胃癌组织标本中SHH阳性表达45例, 阳性表达率为66.18%, TNM分期:Ⅰ期的SHH阳性表达率为10.00%、Ⅱ期为44.44%、Ⅲ期中为82.61%、Ⅳ期为94.12%, 差异具有统计学意义, P<0.05, 见表1。
SHH表达在高分化胃癌组织中的阳性率为33.33%, 中分化胃癌中的阳性率为44.44%, 低分化的阳性率为56.25%, 未分化的阳性率为68.75%, P<0.05, 差异具有统计学意义, 见表1。
有淋巴结转移的患者的SHH阳性率为82.86%, 无淋巴结转移的患者的SHH阳性率为48.48%, 差异具有统计学意义, P<0.05。浸润深度为T3+T4的阳性率为79.31%, 浸润深度为T1+T2的阳性率为48.72%, P<0.05, 差异具有统计学意义, 见表1。
人类的SHH基因位于7号染色体长臂的远端, 可编码生成SHH前体蛋白, SHH前体蛋白可经自我水解和加工形成氨基末端分泌肽, 此氨基末端信号肽具有分泌蛋白的功能, 可与多种细胞进行相互作用, 近年来发现SHH可通过激活癌基因而与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关。在正常的胃组织中, SHH蛋白由胃壁细胞产生并分泌, 而在胃癌患者的癌组织中, SHH的表达可能与胃癌的分期、分化、淋巴转移、浸润等相关[3]。SHH蛋白可参与SHH信号通路的转导, 并可以调控肿瘤的浸润转移及细胞分化, 从而影响肿瘤的分期;SHH蛋白在干细胞的分裂、分化、死亡等过程中起着重要作用, 并且根据SHH表达的差异, 影响正常胃黏膜上皮细胞的分化, 使其停止在不同的分期, 因此, SHH表达的差异可能是引发胃黏膜上皮发生癌变的重要原因[4]。本文研究中, SHH的表达阳性率随胃癌TNM分期而增强, 与分化程度呈负相关, 并淋巴结转移及浸润较深者呈密切相关, 说明SHH的表达可提示胃癌的预后, 阳性率越高, 预后越差。
综上所述, SHH蛋白在大多数胃癌组织中表达升高, 其表达与胃癌的浸润程度、TNM分期以及淋巴结转移情况密切有关, 可将其作为胃癌的诊断、疗效判断的重要指标。
摘要：目的 探讨SHH在胃癌组织中的表达及临床意义。方法 选择本院收治的68例胃癌患者为研究对象, 采集其胃癌组织标本, 应用免疫组织化学SP法, 检测标本中SHH的表达情况, 并分析其表达与临床病理特征的关系。结果 68例胃癌组织标本中SHH阳性表达45例, 阳性表达率为66.18%, SHH的阳性表达与癌组织浸润的深度、淋巴结转移情况、TNM分期等密切相关。结论 SHH蛋白在大多数胃癌组织中表达升高, 其表达与胃癌的浸润程度、TNM分期以及淋巴结转移情况密切有关, 可将其作为胃癌的诊断、疗效判断的重要指标。
关键词：SHH蛋白,胃癌组织,表达,临床意义
[1] 陈小鱼, 吴钊, 王子卫.SHH在胃癌组织中的表达及临床意义[J].重庆医科大学学报, 2010, 35 (3) :372～374.
[2] Alakus H, Grass G, Hennecken J K, et al.Clinic pathological significance of MMP-2and its specific inhibitor TIMP-2in gastric cancer[J].Histol Histopathol, 2008, 23 (8) :917～923.
[3] 王军, 贾育红, 张志勇.Shh和Ptch在胃癌中的表达及其临床意义[J].免疫学杂志, 2011, 27 (6) :544～546.
[4] 冯亚光, 魏正强.Shh、Gli1、Foxm1蛋白在胃癌中的表达及临床意义[J].广东医学, 2011, 32 (19) :2536～2538.
