盐酸二甲双胍片是治疗单纯因饮食没有得到良好的控制而引起的2型糖尿病的降糖良药, 对于治疗肥胖2型糖尿病有显著的功效, 尤其是一些糖尿患者在患有糖尿病的同时还伴有肥胖、高胰岛素血症等问题, 都可以通过盐酸二甲双胍得到有效的治疗。盐酸二甲双胍还能减轻体质量、降低胆固醇, 对于降低、减少糖尿病的多种并发症具有显著的作用。盐酸二甲双胍有水溶性高、致毒率低、不易在人体沉积、不对正常血糖起作用等优点, 被人们广泛应用, 是我国治疗糖尿病症的基本药物。
Agilent LC-1200型高效液相色谱系统;色谱工作站, 自制;高压电源和非接触电导检测器;另外, 实验过程中所有的数据记录及处理都在普通电脑上完成。
盐酸二甲双胍对照品 (批号:100206-201103) ;乙腈为色谱纯;盐酸二甲双胍缓释片 (A批号为131225;B:批号为20140317;C:批号为8030050) ;实验用水为二次蒸馏水;其他试剂为国产分析纯。
首先制备供试品溶液, 准确称取定量供试品, 求出平均片质量, 研细并称取约20 mg盐酸二甲双胍置于20 m L量瓶中, 加流动相溶解后滤过, 再准确量取续滤液5 m L于100 m L的量瓶并稀释至刻度并摇匀, 该溶液即供试品溶液;再制备对照品溶液, 精密称取盐酸二甲双胍对照品10.36 mg, 按供试品制备方法进行配制;其次还要按照规定比例制备空白溶液, 空白溶液不能含有盐酸二甲双胍, 其配制方法按照供试品制备方法进行配制即可。
色谱柱:Nucleosil C18色谱柱;流动相:乙腈 (0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液 (用磷酸调至p H=3.5) (35∶75) ;流速:1.0 m L/min;进样量:10μL;柱温:35℃。非接触电导检测器, 60 k Hz的频率, 60 VP-P的电压。
精密量取对照品溶液2、4、8、12、、16、20μL并分别注入色谱仪, 运用非接触电导检测器检测并记录色谱仪, 通过横坐标是进样量, 纵坐标是封面面积分值的线性关系得到了回归方程Y=678.79X+270.42 (r=0.996) , 这个结果的得出说明盐酸二甲双胍在0.10~1.04μg的范围内的进样量与峰面积线性关系处于良好状态。
将已经吸取准备的3种溶液各10μL分别注入到高效液相色谱仪并用非接触电导检测器检测, 得到的结果记录入色谱图。在这一过程中同一位置的吸收峰在供试品溶液和对照品溶液中都有显现, 空白对照则没有, 即说明实验辅料对实验的测定并没有干扰。
从盐酸二甲双胍对照品溶液中准确的量取出10μL该溶液, 将该溶液连续进样6次测定峰面积, 结果表明峰面积相对标准偏差 (RSD) 为0.20% (n=6) , 即实验中使用的色谱条件比较好, 实验所用的仪器也有比较好的精密度。
将盐酸二甲双胍试品5份, 按供试品溶液的制备方法制备 (批号为131225) , 在同一色谱条件下取出5份试品的溶液各10μL进行测定。结果表明这5份溶液的盐酸二甲双胍测定结果的含量的重复性较好 (平均含量为101.3%, RSD为0.49%) 。
将盐酸二甲双胍对照品溶液准确量取并分别测定5次的0、2、4、8、12 h, 色谱选取实验要求的条件并测定记录峰面积。最后测定的盐酸二甲双胍实验结果表明峰面积基本没有什么变化[峰面积的RSD为0.82% (n=6) ], 说明盐酸二甲双胍的对照品溶液在12 h内的稳定性良好。
将不同批号的盐酸二甲双胍缓释片样品分别制备供试品溶液, 再依次取3个供试品溶液10μL;一一注入液相色谱仪, 观察并记录实验所测定的色谱图, 得出3个不同批号样品中盐酸二甲双胍的各自的含量。结果表明3个溶液中批号131225的盐酸二甲双胍的含量为101.17%, RSD为0.35%;批号为815078的盐酸二甲双胍的含量为101.13%, RSD为0.56%;批号为150301的盐酸二甲双胍的含量为100.93%, RSD为0.35%。
电化学检测具有很多的优点, 比如选择性好、灵敏度高、检测设备廉价、操作简便等。而液相色谱仪中的这类检测装置繁多, 常见的有蒸发光散射、紫外、二极管阵列、示差折光、荧光、化学发光、拉曼光谱、电化学、质谱等。与传统的易造成电极污染并难以清洗的传统接触式电导检测器检测电极与缓冲溶液直接接触不同, 近几年新兴的这种非接触电导检测技术中所用的许多功能结构都比较新, 具体表现再它的检测池以及防污染上。它的检测池结构很简单, 还可以使电极与被测溶液无法直接接触, 防止了电极污染、分离电压干扰等问题的出现。使测定分析物更加简单便捷了。
由于盐酸二甲双胍的特定, 它能在水和甲醇溶液中只能短时间留存一会, 通过一系列的严密对比, 得出磷酸二氢铵溶液是作为流动相最好的选择。
实验的流速能够对实验中的出峰时间起到很大的影响作用, 流速越大, 色谱柱压力越大, 而过大的压力很有可能导致色谱柱损坏。该实验所用的特定色谱条件对于盐酸二甲双胍的测定十分有利, 它能保证实验的流速、色谱柱压力、色谱柱几个要素都处在一个相对稳定的位置。色谱柱使盐酸二甲双胍的分离度提高, 灵敏度上升。在该实验辅料不对实验造成任何影响、不干扰实验的特定条件下, 盐酸二甲双胍的峰形相对较好、出峰也快、分离效果高于一般实验。该实验结果表明该实验方法可以经受实验的反复考验、不会因此而出现数据等方面的误差, 实验的速度也比较快、实验方法简单、准确性强、对于盐酸二甲双胍的测定很有独特的优越处, 即使再很少的实验次数、实验数据下也能很大程度地保证实验的准确性, 是盐酸二甲双胍含量测定可选的可靠实验方法。有了这一测定方法, 盐酸二甲双胍含量的测定再也不是难题, 它为盐酸二甲双胍含量的测定提供了重要的参考依据, 该实验应该得到大量的推广应用, 该实验的推广, 能够使人们对盐酸二甲双胍的掌握更加快速准确。
摘要：目的 是为了建立一种新的可以测定盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍含量的高效液相非接触电导检测法。方法用非接触电导检测器进行实验操作, 采用C18色谱柱 (4.6×250 mm) , 流动相为乙腈 (0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液 (用磷酸调至p H=3.5) (35∶75) , 流速为1.0 m L/min、进样量是10μL、柱温为35℃。结果 盐酸二甲双胍进样量在0.10~1.04μg范围内呈现良好线性关系, 平均回收率为101.00%;RSD为0.26%。结论该法方便快捷、灵敏度高, 为二甲双胍的含量测定提供依据。
关键词：高效液相,非接触电导法,盐酸二甲双胍
[1] 肖羽, 尹玮璐, 陈安丽, 等.高效液相非接触电导法测定盐酸二甲双胍[J].中国当代医药, 2016, 23 (13) :8-10.
[2] 王莎莎, 李悦.高效液相法测定二甲双胍格列吡嗪片中盐酸二甲双胍含量[J].世界最新医学信息文摘, 2016, 16 (30) :43-44.
[3] 宋新康, 曾玉梅.高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍缓释片中盐酸二甲双胍的含量和释放度[J].中国医院用药评价与分析, 2016, 16 (6) :801-803.
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