随着现代药品分析技术的发展, 分光光度法因其灵敏度较高, 价格低, 操作简单、快速, 已成为药品分析中最常用的分析技术之一。选购和安装要考虑一下性能指标:
(1) 波长范围:分光光度计波长范围分为200-1000nm (紫外可见) 、190-1100nm (紫外可见) 、340-1000nm (可见) 、325-1100nm (可见) ,
根据测定的样品主要使用波长来选择。
(2) 光谱带宽:光谱带宽表征仪器的光谱分辨率。按照比耳定律, 光谱带宽应该是越小越好的, 但是如果仪器的光源能量弱, 光学传感器的灵敏度低时, 光谱带宽小了, 也得不到理想的测量结果的。所以, 光谱带宽可调的仪器成为了一种趋势。只做简单的定量分析, 选2nm或4nm就可以满足要求了, 如需定性分析的话, 1nm-2nm基本可以满足;有些分析标准上要求带宽小于2nm的, 可以选择1nm带宽的仪器。兼具科研的可选择可变狭缝的, 可变狭缝目前可分为固定可调 (0.5, 1, 2, 4, 5nm) 和连续可调 (0.01-10nm) 。
(3) 波长精度:简单的定量分析, 波长精度选±2nm就可以了;对数据要求比较严格, 或定性分析使用较多的话, 选±0.3nm可以满足要求。
(4) 光度精度:光度精度是指多次测量平均值与真值之差为光度精度 (ΔT、ΔA) ;最大值与最小值之差为光度重复性。偏差越小, 精度越高。光度精度和光度重复性是非常重要的技术指标, 直接关系到测试结果的准确性。光度精度在不同的吸光度范围是不同的, 因此光度精度的表示一定要指出在多少吸光度或在多少透射比情况下测试的。从下图可以明显的看出吸光度真值与光度精度有着密切的关系, 特别是做高吸光度时表现的更加明显, 所以我们选择光度计的时候要尽量挑选光度精度高的仪器。
(5) 杂散光:杂散光也是仪器性能的主要指标之一, 杂散光的大小决定着测光范围的上限。杂散光对定量分析影响较大, 一般把分析样品的光度范围控制在1.2Abs以下的话影响要小很多。通常以测光信号较弱的波长处 (如200nm, 220nm, 310nm或340nm处) 所含杂散光的强度百分比为指标, 一般要求不超过0.5%。
(6) 光度噪声:噪声也是仪器的重要指标之一, 光度噪声影响光度测量的灵敏度 (信噪比) 、精密度和准确度, 限制测定浓度的下限, 是分析误差的主要来源。由下图可以看出, 当样品的吸光度偏小时, 噪声对测量结果的影响很大, 所以在挑选分光光度计时, 特别是测试低浓度样品时要注意噪声的大小。
(7) 稳定性:稳定性也是分析误差的主要来源之一。国内一般仪器都都能做到±0.005Abs内, 高端仪器要求在±0.001Abs以内。若对稳定性要求比较高, 最好选用双光束分光光度计。
(1) 仪器除具备光度测量功能, 若定性分析较多, 还应具备波普扫描功能。
(2) 具备数据储存及打印功能。随食品分析标准化的推行, 检测数据在线处理功能成为发展趋势, 若有需要, 选购时应考虑设备是否具备数据输出功能, 是否有工作站。
(3) 生产企业选择:
可根据业内朋友推荐或者当地长期合作的商家推荐, 尽量选择在当地有办事处及售后服务机构的厂家, 还应考虑保修期内售后服务的响应速度及保修期后的上门维修服务价格。
安装仪器使用说明进行确认, 确保分光光度计安装的位置、环境、电路等符合要求。确认项目如下表:
(1) 波长精度:汞灯 (546.07nm、253.65nm) 、氘灯 (656.1nm、486.0nm) 、标准滤色片, 重复单向扫描三次, 计算最大差值。
(2) 光度精度:光度精度一般用标准滤色片或的重铬酸钾的0.005mol/L H2SO4溶液进行测定。
(3) 杂散光:一般采用标准滤光片或10g/L的Na I及Na NO3水溶液。在紫外区测定220nm (Na I) 或340nm (Na NO3) 处的透过率T%, 在可见光区用384mg/L的KMn O4, 测定525nm处的透过率T%。
(4) 光度噪音:在时间扫描方式下, 于500nm波长处连续测量120秒钟, 由所记录的吸光度随时间变化的光谱图, 测出峰值即为仪器的噪声。改变仪器的响应时间可改善信噪比。
(5) 稳定性:在时间扫描方式下, 仪器预热2h, 于500nm波长处连续测量1小时, 由所记录的吸光度—时间光谱图曲线的峰—峰值检查仪器的稳定性。
以企业产品的标准品或对照品, 按照产品检测方法进行测定。
(1) 检测限:对不同浓度标准品或对照品进行检测, 获得准确度和精度符合要求的最低检测浓度。
(2) 准确度:三个浓度的对照品或标准品溶液, 按照产品检测方法进行检测, 平行测定3次, 计算回收率, 应符合企业规定。
(3) 重复性:三个浓度的对照品或标准品溶液, 由同一名实验员按照产品检测方法进行检测, 平行测定3次, 计算标准偏差和相对标准偏差, 应符合企业规定。
(4) 重现性:三个浓度的对照品或标准品溶液, 由3名实验员按照产品检测方法进行检测, 平行测定3次, 计算标准偏差和相对标准偏差, 应符合企业规定。
选购分光光度计时, 按照性能、功能等指标需要进行筛选, 以满足现有食品分析需要和企业扩展需要, 不浪费为原则。安装验收时, 要确保仪器处于要求的工作环境, 状态良好, 能适合产品检测需要。
摘要：分光光度计是药品检测最常用的一种分析仪器, 选购时既要考虑分光光度计性能指标能满足产品分析要求, 也要具备一定的扩展空间, 但不一味追求高精度、多功能;新装仪器必须对其性能指标及产品检测适用性进行确认。
关键词：分光光度计,性能指标,检测
[1] 李发美等编著:《分析化学》, 人民卫生出版社2007.
[2] 许金生等编著:《仪器分析》, 南京大学出版社2002.
[3] 戴军等编著:《食品仪器分析技术》, 化学工业出版社2006.
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